【皓元·技术】精准分离，高效纯化：反相制备技术案例分享
反相制备液相色谱(Preparative Reverse Phase Liquid Chromatography, Prep-RPLC)是一种基于溶质在极性流动相和非极性固定相之间的分配差异，通过精确检测并收集相应的馏分来实现物质分离纯化的技术。在这项技术中，固定相通常采用非极性键合相填料，如C18、C8烷基链键合的硅胶，而流动相则由极性有机溶剂（如甲醇、乙腈）和水按一定比例组成。
不同于传统常压硅胶柱层析纯化的繁琐与耗时，反相制备液相色谱技术凭借其高精度、高效率以及全程自动化的显著优势，已成为医药研发领域中至关重要的分离纯化方法。在处理复杂化学反应的样品时，该技术展现出卓越的分离和纯化能力，因此特别适用于药物的杂质分离、异构分离、手性拆分，以及天然产物的分离纯化等关键环节，已成为科研工作中不可或缺的重要利器。
上海皓元医药股份有限公司（以下简称“皓元医药”）反相制备团队拥有国内外先进的自动化仪器和卓越的制备方法开发和优化能力。团队在小试和放大制备方面积累了丰富的实践经验，能够为客户提供高效、快速、专业的分离纯化服务，满足从毫克级到公斤级的各种分离纯化需求。服务范围涵盖多样化的样品类型，包括小分子化合物、小核酸、多肽、PROTAC、XDC及多聚物等。
仪器设备展示
Agilent-HPLC-1260
Shimadzu-LCMS-2020
Agilent-LCMS-6125B
Shimadzu-LH-40
汉邦1L制备液相+DAC150系统
汉邦CS-prep150
Gilson制备+ELSD检测器
汉邦 CS-Prep300
皓元医药反相制备实验室服务内容
•小分子、小核酸、多肽、PROTAC、XDC等化合物的分析、制备方法开发和优化；
•FTE、FFS、工艺及CMC等项目类型的化合物的制备纯化（涵盖毫克级到公斤级的纯化需求）；
•含量低、不稳定、难分离、溶解性差或保留弱的药物杂质的分离制备；
•提供GRLP及GMP条件下原料药和中间体分离纯化的一站式服务。
反相制备在药物研发中的应用案例
案例分享1：优化溶样方式消除溶剂效应影响
项目背景：
在某CMC项目中，由于粗品的溶解性不佳，需添加DMF作为助溶剂。虽然DMF的引入起到了很好的促溶作用，但其在后续的上样阶段产生了明显的溶剂效应（如图1-1），该效应给产品质量和生产工艺的稳定性造成了很大的影响，导致生产无法达到既定的标准与要求。
图1-1：优化溶样方式前
优化策略：
通过改变溶样方式，避免了助溶剂的添加。首先，采用大量高比例有机相的乙腈/水混合溶液（乙腈:水 = 8:2）溶解待分离的样品，待样品完全溶解后，换用低比例有机相的乙腈水溶液进行稀释，将待上样体系中的乙腈比例逐渐降至20%，之后按照正常程序进行进样和洗脱操作。换用该溶样方式后，分离图谱上呈现了理想的分离峰型，杂质得到了有效的分离（如图1-2）。
图1-2：优化溶样方式后
案例分享2： ELSD检测器在反相制备中的应用
项目背景：
随着药物研发领域的不断拓展与深入，制备项目中出现了越来越多不具备紫外吸收特性的样品。面对这一趋势，如何有效地在制备过程中检测这类目标化合物变得至关重要。
如图2-1，在某个复杂的合成案例中，样品内一共混合生成了3种异构体。其中的化合物8研发人员已通过自主纯化实现了大部分的提取，但剩余的化合物7和化合物9难以分离和纯化，而且它们几乎没有紫外吸收特性，因此无法用传统的紫外检测器进行检测和制备。
图2-1：无紫外吸收特性的3种异构体
优化策略：
对此，我们平台通过采用ELSD （蒸发光散射检测器 ）的联用，专门解决此类紫外吸收微弱或无吸收的样品制备需求，成功实现了对目标物的有效检测和制备，案例的具体制备图谱如图2-2。ELSD凭借其高灵敏度和广泛适用性，在反相制备中展示了重要的应用潜力。
图2-2：采用ELSD检测器收集馏分的制备图谱
案例3： 匹配合适的色谱柱实现分离方法优化
项目背景：
该案例中的目标化合物与杂质结构相似且极性相近，在常用的XB-C18色谱柱分离条件下，这两者在分离图谱中重合在了一起，无法实现有效的分离（如图3-1）。
图3-1：采用XB-C18柱分离的制备图谱
优化策略：
皓元医药反相制备平台拥有丰富且多样化的色谱柱资源，在我们平台的精心筛选与评估下，确认ODS-3色谱柱适配该分离体系。更换色谱柱后，我们成功实现了目标化合物与杂质的基线分离（如图3-2）。
图3-2：采用ODS-3柱分离的制备图谱